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pcr實驗室分區及功能

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pcr實驗室分區及功能

pcr實驗室分區及功能:

1、試劑貯存和準備區。該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的製備、試劑的分裝和主反應混合液的製備。試劑和用於標本製作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,並在本區內製備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區並沒有嚴格的要求。

2、標本製備區。該區域主要進行的操作為臨牀標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外,由於在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。  

3、擴增反應混合物配製和擴增區。該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已製備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本製備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和製備區)製備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增後必須打開反應管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進行。本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應儘量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超淨台內進行。  

4、擴增產物分析區。該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。